计数方法适用性试验中,采用平皿法或薄膜过滤法时,试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.5~2范围内;采用mpn法时,试验组菌数应在菌液对照组菌数的95%置信限内。若各试验菌的回收试验均符合要求,照所用的供试液制备方法及计数方法进行该供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数。
方法适用性确认时,纯化水微生物限度,若采用上述方法还存在一株或多株试验菌的回收达不到要求,那么选择回收接近要求的方法和试验条件进行供试品的检查。
供试品检查
检验量
检验量即一次试验所用的供试品量(g、ml或c㎡)。
一般应随机抽取不少于2个zui小包装的供试品,混合,取规定量供试品进行检验。
除另有规定外,一般供试品的检验量为10g或10ml;膜剂为100c㎡;贵重---、微量包装---的检验量可以酌减。检验时,应从2个以上zui小包装单位中抽取供试品,大蜜丸还不得少于4丸,膜剂还不得少于4片。
供试品的检查
按计数方法适用性试验确认的计数方法进行供试品中需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定。
胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基用于测定需氧菌总数;沙氏---琼脂培养基用于测定霉菌和酵母菌总数。
阴性对照试验 以稀释液代替供试液进行阴性对照试验,微生物限度,阴性对照试验应无菌生长,如果阴性对照有菌生长,应进行偏差调査。
供试品中微生物的回收
……涂布法“取15~20ml”修订为“取适量(通常为15~20ml)”。……(2)薄膜过滤法薄膜过滤法所采用的滤膜孔径应不大于0.45jltm,直径一般为50mm,人手微生物限度,若采用其他直径的滤膜,冲洗量应进行相应的调整。供试品及其溶剂应不影响滤膜材质对微生物的截留。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时,应---滤膜在过滤前后的完整性。
学习:这个“完整性”应该类似生产过程所用的滤膜的完整性,不同的是“---”的方法是滤器验收、厂家报告单、使用中外观检查等;---时应该进行适当方式的完整性检测。
配制培养基注意事项
1.灭菌时严格按照规定加热、加压,切忌时间过长压力过高,否则会造成营养成分的破坏。
2.切忌使用铜锅、铁锅配制培养基。
3.培养基不能二次高压灭菌。
4.划线用培养基可放入冰箱或培养箱除去水分。
无菌操作注意事项
1.进入无菌室之前---行空气消毒,工作人员进入无菌室以前,---微生物限度,必须于缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋。
2.动作要轻,尽量减少走动,以免搅动空气。
3.操作要靠近酒精灯火焰区,使用吸管要用吸球。
4.接种环/接种针用前用后进行火焰灭菌。
5.工作结束作好终末消毒,所有培养物均应高压灭菌后再扔掉,以免污染环境。
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