菌落总数测定注意事项
1.选取样品要有代表性,如为固体样品要多采几个部位,液体检样要混匀。
2.每次做样从开始到结束都要进行超净台空气净度的监测,同时对所有灭菌物品---白对照。
3.为减少稀释倍数的误差,物体微生物分析方法验证,在做连续递增稀释时,每一稀释液应充分振摇使其均匀,同时每一稀释度换一支吸管。
4.在进行连续稀释时,应将吸管内液体沿壁流入,勿使吸管触及稀释液。
5.倾倒营养琼脂培养基平板时,---微生物分析方法验证,温度要在46±1℃之间,数量要在15ml左右为宜,不要太多太少。
6.培养物48h培养后培养基失重不超过15%,培养箱内要放水。
7.样加入平皿后应立即倾注培养基并旋转混匀,一般从稀释到倾注不超过20分钟。
8.平皿内如有链状菌落生长时:菌落之间无明显界限且仅有一条链可视为一个菌落,如为不同来源的几条链则将每条链各做一个菌落记。
9.做菌落记数时平板里所有的菌落都要记数。
培养基的制备
1.胰酪大豆胨液体培养基
胰酪胨17.0克
---5.0克
大豆木瓜蛋白酶---物3.0克
磷---二钾2.5克
---(一水合)2.5克
水1000ml
除---外,取上述成分,混合,微温溶解,滤过,调节 ph 值使灭菌后在 25℃的 ph 值为 7.3±0.2,加入---,分装,灭菌。
胰酪大豆胨液体培养基置 20~25℃培养。
2. 胰酪大豆胨琼脂培养基
胰酪胨15.0克
---5.0克
大豆木瓜蛋白酶水解物5.0克
琼脂15.0克
水1000ml
除琼脂外,取上述成分,混合。微温溶解,调节 ph 值使灭菌后在 25℃的 ph 值为 7.3±0.2,加入琼脂,加热溶化后,工作台微生物分析方法验证,摇匀,分装,灭菌。
3.沙氏---液体培养基
沙氏---琼脂培养基照微生物限度检查法(附录ⅹⅲ c)制备。
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