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微生物限度检测方法主要包括3种。      

1.微生物计数法:该种检测方法用于能在有氧条件下生长的嗜温---和---的计数。本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准。检验项目分别为:需氧菌、霉菌及酵母菌计数。其中,需氧菌计数方法适用性试验:铜绿假单胞菌、金黄色、枯草芽孢。霉菌及酵母菌计数方法适用性试验:白色、黑曲霉。      

2.控制菌检查法:控制菌检查法系用于在规定的试验条件下,检査供试品中是否存在特定的微生物。分别为培养基适用性检查和控菌检查方法适用性试验。控制菌计数方法适用性试验:耐胆盐革兰阴性菌、大肠埃希氏菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄菌、梭菌、白色。      

3.方法学适用性试验:---的微生物计数方法应进行方法适用性试验,以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。  




---效力

接种大肠埃希菌、金黄色球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至胰酪胨大豆肉汤培养基中,30~35℃培养18~24小时;接种白色的新鲜培养物至沙氏---液体培养基中,20~25℃培养24~48小时。上述培养物用0.9%无菌---溶液制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏---琼脂斜面培养基中,检测报告,20~25℃培养5~7天,加入3~5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌---溶液,将孢子洗脱。然后,工作台检测报告,采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌---溶液制成每1ml含孢子数50~100cfu的孢子悬液。








2.接种和稀释

   按下列要求进行供试液的接种和稀释,制备微生物回收试验用供试液。所加菌液的体积应不超过供试液体积的1%。为确认供试品中的微生物能被充分检出,首先应选择zui低稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。

   (1)试验组 取上述制备好的供试液,加入试验菌液,混匀,使每1ml供试液或每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于100cfu。

   (2)供试品对照组 取制备好的供试液,物体检测报告,以稀释液代替菌液同试验组操作。

   (3)菌液对照组取 不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液,按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。

   若因供试品抗jun活性或溶解性较差的原因导致无法选择zui低稀释级的供试液进行方法适用性试验时,应采用适宜的方法对供试液进行进一步的处理。如果供试品对微生物生长的抑制作用无法以其他方法消除,供试液可经过中和、稀释或薄膜过滤处理后再加入试验菌悬液进行方法适用性试验。



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