---效力

接种大肠埃希菌、金黄色球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至胰酪胨大豆肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时；15-2010食品安全标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数gb4789。接种白色的新鲜培养物至沙氏---液体培养基中，20～25℃培养24～48小时。上述培养物用0.9%无菌---溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏---琼脂斜面培养基中，20～25℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌---溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌---溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液。

试验所用的菌株传代次数不得超过 5 代（从jun种保藏中心获得的冷冻干燥jun种为第 0 代），并采用适宜的jun种保藏技术进行保存，以---试验菌株的生物学特性。培养基适用性检查的jun种及新鲜菌体培养见表 1。

表 1培养基适用性检查、方法适用性试验、---效力测定用的试验菌培养条件

试验菌株                   试验培养基                         培养温度             培养时间

1、金黄色putao球菌

胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基

30～35℃

18～24小时

2、铜绿假单胞菌）

3、大肠埃希菌

胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大

豆胨液体培养基

4、白色nian珠菌

沙氏---琼脂培养基或沙氏葡

萄糖液体培养基

20～25℃

24-48小时

5、黑曲霉

20～25℃5～7天或直到获得丰富的孢子

微生物限度检查

   （3）mpn法 mpn法的精密度和准确度不及薄膜过滤法和平皿计数法，仅在供试品需氧菌总数没有适宜计数方法的情况下使用，本法不适用于霉菌计数。若使用mpn法，按下列步骤进行。

   取照上述“供试液的制备”“接种和稀释”和“抗jun活性的去除或灭活”制备的供试液至少3个连续稀释级，每一稀释级取3份1ml分别接种至3管装有9～10ml胰酪大豆胨液体培养基中，同法测定菌液对照组菌数。---时可在培养基中加入表面活性剂、中和剂或灭活剂。倾注法:取少许含菌材料放入无菌培养皿中，然后倾入已融化并已冷却至48℃左右的琼脂灭菌培养基，摇匀后冷却凝固。

   接种管置30～35℃培养3天，逐日观察各管微生物生长情况。如果由于供试品的原因使得结果难以判断，可将该管培养物转种至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基，在相同条件下培养1～2 天，观察是否有微生物生长。根据微生物生长的管数从表3查被测供试品每1g或每1ml中需氧菌总数的可能数。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按<医yao工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法>的现行---进行洁净度验证。

   3.mpn 法

   取规定量供试品，按方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和供试品接种，所有试验管在30～35℃培养3～5天，如果需要确认是否有微生物生长，按方法适用性试验确定的方法进行。记录每一稀释级微生物生长的管数，从表3査每1g 或1ml供试品中需氧菌总数的可能数。而对于金黄色葡萄qiu菌在速冻食品中的存在量，ws部于2011年11月24日公布食品安全---<速冻面米制品>，允许金葡菌---存在。

   结果判断

   需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的总菌落数（包括---菌落数）；单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物。霉菌和酵母菌总数是指沙氏---琼脂培养基上生长的总菌落数（包括---菌落数）。若因沙氏---琼脂培养基上生长的---使霉菌和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可使用含kang生素（如氯霉su、庆大霉su）的沙氏---琼脂培养基或其他选择性培养基（如玫瑰红钠琼脂培养基）进行霉菌和酵母菌总数测定。使用选择性培养基时，应进行培养基适用性检查。若采用mpn法，测定结果为需氧菌总数。